Культивирование одноклеточных водорослей

Из пресноводных водорослей наиболее часто культивируют зеленые жгутиковые водоросли (Phacus, Euglena), протококковые водоросли (Scenedesmus, Chlorella), а также Спирулину (Spirulina); из морских — Dunaliella tertiolecta, Nephrochloris salina, Isochrysis galbona, monochrysis lutheri, Phaeodactylum tricornutum, Platymonas viridis, а также морскую хлореллу (Chlorella sp. f. marina).

Необходимо сразу же отметить, что получение чистой культуры одноклеточных водорослей и дальнейшее ее культивирование — занятие весьма непростое, и лучше пользоваться услугами или хотя бы консультациями специалистов, имеющих знания и практический опыт в этой области.

Тем не менее, общая схема разведения одноклеточных водорослей выглядит следующим образом:

1133443Культуру получают в лаборатории, либо в аквариуме или пруду во время цветения воды в них.
При заборе источника культуры в водоеме,  необходимо избавиться от «лишних» частиц в ней. Тину можно удалить с помощью палочки с несколькими набитыми гвоздями, либо просто палки, наматывая тину на нее. Подойдет также крупный рыболовный крючок с грузом. Ил убирают обыкновенной ложкой, остро заточенной с одной стороны.

Если водоросли необходимо отделить от планктона, то поступают так: планктонную массу добывают с помощью специального сачка в форме конуса из плотной ткани. К нижней части сачка приделывается металлическая или стеклянная воронка, имеющая пластмассовую или резиновую трубку  с зажимом. К верхней части сачка пришивают ленту из грубого материала, которую прикрепляют к металлическому кольцу. Сачок крепится на веревке.
Затем сачок забрасывают в водоем и тянут на себя, отслеживая, чтобы он не касался дна. Такие «броски» можно повторить до 10 раз. После чего сачок вынимают, дают стечь воде, открывают зажим и сливают содержимое в стеклянную банку. Пробу изучают под микроскопом.

Далее начинают процедуру отделения клеток необходимых для культивирования видов водорослей.
Для этой процедуры потребуются стеклянные пробирки и ватно-марлевые тампоны, обернутые алюминиевой фольгой. Тампоны предварительно прогревают в духовке при 120 градусах в течение часа (от этого вата может слегка побуреть).

Жгутиковые водоросли (факус, эвглена) выделяют, капнув воду с добытойgall01 культурой на затвердевшую агаризованную питательную среду в пробирке.

Данная среда состоит из: NН4NO3 — 0,2 г/литр, Nа2НР04 — 0,04 г/литр, КСl — 0,1г/литр, FеСl3 — 0,01 г/литр, MgSO4 — 0,25 г/литр,  5-10 капель почвенной или торфяной вытяжки на каждые 100 мл. Также желательно добавить в среду несколько капель нежирного мясного бульона.
2 г агара растворяют при 100 °С в 100 мл добытой водной среды, охлаждают до 45 °С, разливают по пробиркам и охлаждают до комнатной температуры в наклонном положении.
Пробирку освещают люминесцентной лампой. Через две недели  поверхность агара покрывается колониями водорослей, которые изучают под микроскопом, отделяют нужный вид водоросли и заносят его стерильным предметом в следующую пробирку с добавлением агара. Процедуру необходимо повторять до получения чистой культуры.

Еще один способ выделения нужного вида водорослей: чистую культуру получают, разбавляя содержимое в пробирке до концентрации 1 клетка на 1 мл. и по 1 мл. такой культуры капают в пробирки с агаром. Через 2-3 недели пробирка зарастает водорослями нужной культуры.

Можно и совместить эти два способа получения необходимой культуры водорослей.

Разведение полученной чистой культуры начинают в небольших: 100 — 500 мл,  и неглубоких  емкостях с плоским дном; по мере роста плотности культуры, ее переводят в более крупные емкости: 5-10 литров и более.

6ппппро

Морские водоросли также культивируют в неглубоком сосуде, объемом до 0,5 л, с большой площадью поверхности. Далее, по мере разрастания водорослей и увеличения их плотности, используют более крупные сосуды.
Культура водорослей должна иметь зеленый цвет.
Необходимо круглосуточное освещение люминесцентными лампами, а сам сосуд лучше поставить на солнечной стороне.

Емкость с культивируемыми морскими водорослями заполняют питательной средой.
Подойдет так называемая среда Уолна: на 1 литр морской воды (от 10 до 35 г. аптечной морской соли на 1 л пресной воды) добавляют (в  мл.): FeСl3 • 6Н2O — 1,3; МnСl2 • 4Н2O — 0,36; Н3ВО3 — 34,6; NaNO3 — 100; NaН2РO4 • 2Н2O — 20; ZnС — 5; СоСl2 • 6Н2O — 9; (NH4)6МO02 • 4Н2O — 9; СuSO4 • 5Н2O — 20; ЭДТА (этилендиаминтетрауксусная кислота) (лучше Nа2 ЭДТА • 2Н2О) — 45; а также витамины: В1 — 100 ед/л; В12 — 5 ед/л.
В среду также рекомендуется добавить почвенную вытяжку-50 мл. Ее готовят, залив хорошую, садовую почву кипящей дистиллированной водой; после оседания мути раствор фильтруют. Перед использованием воду отстаивают несколько недель, но не более месяца!

Хорошие результаты дает выращивание морских водорослей на среде Гольдберга, в которой на 100 мл дистиллированной воды готовятся:  раствор 1: 10,1 г KNО4; раствор 2: 1,421 г Na2НРO4; раствор 3: 27,03 мг FеСl3*6Н2O; 19,79мг МnСl2*4Н2O; 23,79мг СоСl2*6Н2O;
Затем к 1 л морской воды следует добавить: 2 мл раствора 1; 0,5 мл раствора 2 и 1 мл раствора 3.
Следует отметить, что СО(NН2)2 — мочевина, обладает большими достоинствами, чем минеральные источники азота.

Общие советы по культивированию водорослей:

Питательные среды разведения как для морских, так и для пресноводных одноклеточных необходимо в течение 3-х дней нагревать по 15 минут до 70-75 °С с выдерживанием в промежутках при 25 — 30 °С, что позволяет уничтожить ненужные, вновь вышедшие из спор организмы.
При высокой плотности культивируемых водорослей рекомендуется продувка сосуда СО2.
Освещение можно осуществлять круглосуточно.
В начале процесса культивирования комнатная температура вполне подойдет, а затем ее можно поднимать, одновременно увеличивая и освещение. Перегрев очень вреден! Верхний предел температуры у разных родов водорослей разный.
В период неактивной фазы культивирования (когда нет необходимости кормить рачков и коловратку) можно подменивать до 1/3 воды в емкости для разведения на равный объем отстоянной в течении 2-3 дней водопроводной воды.

Если есть желание культивировать водоросли в больших количествах, можно изготовить стеллаж из стеклянных или пластмассовых трубок, последовательно соединенных шлангом.

Циркуляцию воды в таком стеллаже осуществляют при помощи эрлифта, благодаря которому одновременно происходит также и насыщение среды культуры углекислым газом. Стеллаж из трубок лучше расположить у окна или между трубками поставить люминисцентные лампы. Можно также организовать циркуляцию по прозрачному пластмассовому шлангу, обмотав этим шлангом люминисцентную лампу.

32смисмиТакая установка гарантирует наличие прекрасных кормовых организмов-одноклеточных водорослей, являющихся, в свою очередь, кормом для других кормовых организмов: рачков и коловраток, в течение всего года.

Любители создают и различные установки из подручных средств для разведения микроводорослей, как например установка, изображенная на картинке внизу (культивировалась хлорелла и давала за сутки объем, превышающий исходную массу в пять раз): плоский аквариум (фотореактор) высотой 1*1*0,04 м (объем 40 литров), в котором размещались стеклянные перегородки для увеличения пути, проходимого водой. Подсоединенный баллон СО2. Через аквариум прогонялась вода из бассейна, в котором разводили рыбу, предварительно прошедшая через песочный фильтр. Восемь люминесцентных ламп мощностью по 36 Вт с обеих сторон.
После аквариума вода самотеком поступала в молочный сепаратор проточного типа, который был настроен на разделение чистой воды и суспензии микроводорослей.

впвпапа545

Поделиться:

Культивирование одноклеточных водорослей: Один комментарий

  1. Культивирование Monoraphidium contortum куда проще, чем хлореллы и вряд ли отличается от последней «полезными» свойствами. По крайней мере фотолюминисценция ферментов обоих водорослей одинаковая. Да и пересылка -обычным письмом апланоспор contortum, все одно, что пересылать семена томатов.

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован.

Можно использовать следующие HTML-теги и атрибуты: <a href="" title=""> <abbr title=""> <acronym title=""> <b> <blockquote cite=""> <cite> <code> <del datetime=""> <em> <i> <q cite=""> <s> <strike> <strong>